亚麻子

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TUhjnbcbe - 2024/6/30 21:25:00
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一、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的原理:

试样经酸水解后提取脂肪,其中α-亚麻酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)、二十二碳六烯酸(DHA)经酯交换生成甲酯后,通过气相色谱仪分离检测,以保留时间定性,外标法定量。

二、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的试剂和材料:

2.1氢氧化钾(KOH)。

2.2盐酸(HCl)。

2.3无水乙醚(C2H5OC2H5)。

2.4乙醇(CH3CH2OH):体积分数≥95%。

2.5石油醚:沸程30℃~60℃。

2.6正己烷(CH3(CH2)4CH3):色谱纯。

2.7甲醇(CH3OH):色谱纯。

2.8无水硫酸钠(Na2SO4)。

2.9试剂配制::氢氧化钾甲醇溶液(0.5mol/L):称取2.8g氢氧化钾,用甲醇溶解并定容至mL,混匀。

三、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的标准溶液:

3.1标准品:

3.1.1α-亚麻酸甲酯(C19H32O2):纯度≥99.0%。

3.1.2EPA甲酯(C21H32O2):纯度≥98.5%。

3.1.3DPA甲酯(C23H36O2):纯度≥98.0%。

3.1.4DHA甲酯(C23H34O2):纯度≥98.5%。

3.2标准溶液的配制:

3.2.1单个脂肪酸甲酯标准储备液(4.0mg/mL):称取.0mgα-亚麻酸甲酯、EPA甲酯、DPA甲酯、DHA甲酯标准物质于25.0mL容量瓶中,分别用正己烷溶解并定容至刻度,摇匀。此溶液应贮存于-18℃冰箱中。

3.2.2脂肪酸甲酯混合标准中间液(1.0mg/mL):分别吸取脂肪酸甲酯标准储备液2.50mL于10.0mL容量瓶中,摇匀,亦为标准曲线最高浓度,临用时配制。

3.2.3脂肪酸甲酯标准工作液:分别吸取脂肪酸甲酯中间液0.40mL、0.80mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL于10.0mL容量瓶中,用正己烷定容,此浓度即为0.mg/mL、0.mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.40mg/mL的标准工作液,临用时配制。

四、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的分析步骤:

4.1试样制备:

4.1.1试样处理:

4.1.1.1固体试样:称取已粉碎混合均匀的待测试样0.5g~2g(精确到0.g)(含待测组分约5mg/g~10mg/g)加入50mL比色管中,加8mL水,混匀后再加10mL盐酸。

将比色管放入70℃~80℃水浴中,每隔5min~10min以涡旋混合器混合一次,至试样水解完全为止,约需40min~50min。取出比色管,加入10mL乙醇,混合。冷却至室温后将混合物移入mL具塞量筒中,以25mL无水乙醚分次洗比色管,一并倒入量筒中。

密塞振摇1min。加入25mL石油醚,密塞振摇1min,静置30min,分层,将吸出的有机层过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中。再加入25mL无水乙醚密塞振摇1min,25mL石油醚,密塞振摇1min,静置、分层,将吸出的有机层经过无水硫酸钠(约5g)滤入浓缩瓶中,按“再加入25mL无水乙醚……,静置、分层、过无水硫酸钠”重复操作一次,将全部提取液用旋转蒸发仪于45℃减压浓缩近干。用正己烷少量多次溶解浓缩物,转移至25mL容量瓶并定容,摇匀。按4.1.2步骤甲酯化处理。

4.1.1.2油类制品:称取混合均匀的油类制品0.2g~1g(精确到0.g)(含待测组分约10mg/g~20mg/g。)至25mL容量瓶中,加入5mL正己烷轻摇溶解,并用正己烷定容至刻度,摇匀。按4.1.2步骤甲酯化处理。

4.1.2甲酯化

吸取待测液(4.1.1.1,4.1.1.2)2.0mL至10mL具塞刻度试管中,加入2.0mL氢氧化钾甲醇溶液,立即移至涡旋混合器上振荡混合5min,静置5min,加入6mL蒸馏水,上下振摇0.5min,静置分层后,吸取下层液体,弃去后再反复用少量蒸馏水进行洗涤,并用吸管弃去水层,直至洗至中性(若有机相有乳化现象,以r/min离心10min),吸取正己烷层待上机测试用。

五、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的色谱条件:

色谱柱:键合交联聚乙二醇固定相,柱长30m,内径0.32mm,膜厚0.5m或同等性能的色谱柱。

柱温箱温度:起始温度℃,10℃/min升温至℃,再以8℃/min升温至℃,保持13min。

进样口温度:℃;进样量1L,分流比20∶1。

FID检测器温度:℃。

载气:高纯氮气,流量1.0mL/min,尾吹25mL/min。

氢气:40mL/min;空气mL/min。

六、气相色谱仪测定亚麻酸、EPA、DPA和DHA的含量的结果计算:

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